सेल संस्कृतींच्या क्रायोप्रिझर्वेशनसाठी मूलभूत टिपा

सेल संस्कृतींच्या क्रायोप्रिझर्वेशनसाठी मूलभूत टिपा

सामान्य वाढीच्या क्रियाकलापांमध्ये पेशी त्यांचे चयापचय सुरू ठेवतात, ज्यास विविध प्रथिनेंचा सहभाग आवश्यक असतो. जेव्हा तापमान -70 ° से. म्हणूनच, अत्यंत कमी तापमान असलेल्या वातावरणात, पेशी त्यांचे चयापचय क्रियाकलाप थांबवू शकतात आणि दीर्घकालीन संचयनास अनुमती देणार्‍या सुप्त अवस्थेत प्रवेश करू शकतात.

1. प्रायोगिक साहित्य

बेस सामग्री:

मूलभूत संस्कृती माध्यम

सीरम (पारंपारिक एफबीएस/एनबीएस)

अल्ट्राप्यूर वर्कबेंच

निर्जंतुकीकरण डायमेथिल सल्फोक्साईड (डीएमएसओ)

निर्जंतुकीकरण पीबीएस फॉस्फेट बफर मीठ द्रावण

पाइपेटिंग गन

इलेक्ट्रिक पाइपेटिंग गन

प्रयोगांची तयारी

अ) अतिशीत समाधानाची तयारी:

सामान्य पेशी: 55% बेसल मध्यम + 40% बोवाइन सीरम (एफबीएस/एनबीएस) + 5% डीएमएसओ

महत्त्वपूर्ण पेशी: 90% बोवाइन सीरम (एफबीएस/एनबीएस) + 10% डीएमएसओ

तयार केलेल्या क्रायोप्रिझर्वेशन सोल्यूशनला 15 मिली सेंट्रीफ्यूज ट्यूब [नेस्ट] मध्ये तयार करा आणि नंतर वापरण्यासाठी 4 डिग्री सेल्सियस वर ठेवा.

(ब) गोठवण्याची पेशी तयार करणे:

पेशी अतिशीत करण्यापूर्वी, चांगल्या वाढीची स्थिती असलेल्या पेशी निवडा आणि लॉगरिथमिक वाढीच्या टप्प्यात आणि सेलची स्थिती राखण्यासाठी अतिशीत 12-24 तास आधी ताजे मध्यम मध्यम करा.

2. प्रायोगिक प्रक्रिया

1. गोठलेल्या पेशींची घनता पहा, जे सुमारे 80%~ 90%आहे. जुन्या माध्यमाची आकांक्षा आणण्यासाठी, पेशी 1-2 वेळा धुण्यासाठी निर्जंतुकीकरण पीबीएस घाला आणि संस्कृतीच्या वातावरणात उर्वरित माध्यम काढून टाकण्यासाठी पाइपेट गन वापरा.

२. ट्रिप्सिनला पेशींमध्ये प्रवेश करण्यास परवानगी देण्यासाठी योग्य प्रमाणात ट्रिप्सिन किंवा पाचक रस घाला आणि पचनासाठी इनक्यूबेटरमध्ये ठेवा. मायक्रोस्कोप अंतर्गत पेशींच्या स्थितीचे निरीक्षण करा: साइटोप्लाझम मागे घेत आहे आणि पेशी यापुढे पत्रकात जोडल्या जात नाहीत. या टप्प्यावर, पचन प्रक्रिया थांबविण्यासाठी स्टॉप सोल्यूशन जोडा.

Cell. सेल निलंबन तयार करण्यासाठी टीप असलेल्या पेशींना हळूवारपणे फुगवा आणि 3-5 मिनिटांसाठी 1000 आरपीएमवर सेल निलंबन सेंट्रीफ्यूज करा.

सुपरनेटॅन्टला टाकून द्या, योग्य प्रमाणात अतिशीत द्रावण जोडा आणि पेशींना एकसारखेपणाने मोजण्यासाठी हळूवारपणे पिपेट जोडा. अंतिम घनता 5 × 106/एमएल ~ 1 × 107/एमएल करण्यासाठी क्रायोप्रिझर्वेशन माध्यमासह सेल घनता समायोजित करा.

Est. अपेक्षित क्षमतेनुसार क्रायोजेनिक ट्यूब विभक्त करण्यासाठी पिपेट गन वापरा आणि कॅप आणि सील करण्यासाठी स्वयंचलित कॅपिंग मशीन वापरा.

Standary. मानक क्रिओप्रिझर्वेशन प्रोग्राम हा -१ डिग्री सेल्सियस ते -२ डिग्री सेल्सियस/मिनिटाचा शीतकरण दर आहे आणि गोठवलेल्या पेशी हळूहळू खालील चरणांनुसार गोठवल्या जाऊ शकतात: खोलीचे तापमान → ° डिग्री सेल्सियस (२० मिनिट) → - 20 डिग्री सेल्सियस (30 मिनिट) → -80 डिग्री सेल्सियस ° से (रात्रभर) lical द्रव नायट्रोजनमध्ये दीर्घकालीन स्टोरेज.

हे रात्रभर -80 डिग्री सेल्सियसवर थेट फ्रीजरमध्ये देखील संग्रहित केले जाऊ शकते आणि नंतर स्टोरेजसाठी लिक्विड नायट्रोजनमध्ये हस्तांतरित केले जाऊ शकते.

योंग्यू मेडिकल हा एक उच्च-टेक एंटरप्राइझ आहे जो आर अँड डी, बायोमेडिकल उपभोग्य वस्तूंचे उत्पादन आणि विक्रीत तज्ञ आहे. पिपेट टिप्स, पाइपेट्स, पीसीआर प्लेट, सेल कल्चर उत्पादने आणि इतर जैविक प्रयोगशाळेच्या उपभोग्य वस्तू. योंग्यू मेडिकल आपल्या विश्वास आणि निवडीस पात्र आहे! सल्लामसलत मध्ये आपले स्वागत आहे!